Система блоттинга LI-COR MPX позволяет одновременно протестировать до 48 образцов на одном блоте. Идеально подходит для скрининга условий проведения вестерн-блоттинга, в частности – для подбора разведения антетила. Следующие условия могут быть быстро оптимизированы с помощью системы LI-COR MPX:

• подбор первичного антитела: какое антитело имеет лучшую специфичность и оптимальное разведение,
• выбор времени инкубации,
• выбор оптимального блокирующего буфера,
• подбор вторичного антитела с наилучшим связыванием с мишенью и наименьшим фоновым неспецифичным связыванием с мембраной,
• скрининг любых условий, необходимых для проведения блоттинга в качестве исследовательского эксперимента.

Наиболее рутинное применение системы «MPX» – подбор оптимального разведения антител. Вместе с тем, систему блоттинга LI-COR MPX можно использовать и для самостоятельных экспериментов, где требуется одновременный анализ множества образцов.

Основные свойства

• 24 канальные порта для нанесения образцов.
• Возможность размещения на одной мембране:
  • до 24 проб (при одноцветной детекции),
  • до 48 проб (при двухцветной детекции; например, с помощью имиджинговых систем семейства ODYSSEY – по NIR каналам 600 нм и 800 нм).
• Малый объём каналов – 160 мкл (позволяет существенно снизить расход реагентов).
• Шахматный порядок расположения каналов и скошенные кромки каналов для удобства работы.
• Возможность использования как одноканальных, так и многоканальных пипеток.
• Компартмент для размещения мембраны 7 × 8,5 см.
• Возможность работать с PVDF и нитроцеллюлозными мембранами.

Техника использования системы MPX

Предварительно проводится электрофорез белков. Для удобства дальнейшего позиционирования мембраны в системе LI-COR MPX целесообразно нанести видимые белковые маркеры в первый слот геля.

После проведения электрофореза необходимо осуществить перенос белков с геля на мембрану любым доступным методом. После переноса белков мембрана отделяется от геля и обрабатывается блокирующим буфером (в стандартных случаях).

После перечисленных подготовительных манипуляций собирается система LI-COR MPX. Каналы верхней (прозрачной) стенки системы должны накладываться строго на треки движения белков при электрофорезе, которые были перенесены на мембрану. В данные каналы с помощью пипетки добавляются растворы первичных антител, вторичных антител и промывочные буферы (в той последовательности и через те промежутки времени, которые прописаны в методике выполнения блоттинга в вашей лаборатории для конкретных образцов). Один из растворов, используемых во время всей процедуры – обычно является объектом скрининга, то есть его состав может варьироваться для разных каналов системы LI-COR MPX.

Можно использовать как одноканальную пипетку и наносить каждый раствор по очереди в каждый канал – или же можно использовать многоканальную пипетку и добавлять раствор сразу во все каналы системы LI-COR MPX. Выбор типа пипетки зависит как от уровня опытности оператора, так и от типа скрининга и организации эксперимента.

Для добавления в один канал рекомендуется использовать 200 мкл каждого из растворов. Объём канала 160 мкл. Избытки раствора выливаются через специальное отверстие на противоположном конце канала.

После завершения всех инкубаций и промывок – вы можете разобрать систему LI-COR MPX и отсканировать блот-мембрану на любом подходящем сканере или в имиджинговой системе. В случае хемилюминесцентной детекции можно использовать сканер C-DiGit производства компании LI-COR. Для детекции в ближней ИК-области рекомендуется применять имиджинговые системы семейства ODYSSEY.

Подробнее о технике использования и возможностях применения системы LI-COR MPX вы можете прочитать в Руководстве пользователя.